制備液相色譜是將分離填料填裝在色譜柱內(nèi),以液體流動(dòng)相進(jìn)行洗脫,利用藥物不同活性成分與填料相互作用力的差異進(jìn)行分離。在液相制備色譜分離中,一般將柱壓力低于0.5MPa的稱(chēng)為低壓制備色譜,壓力0.5-2MPa的稱(chēng)為中壓制備色譜,壓力>2MPa的稱(chēng)為高壓制備色譜。
對(duì)樣品中的成分進(jìn)行定性定量分析,同時(shí)可對(duì)復(fù)雜相中的各種成分,特別是微量成分進(jìn)行分離。有高分辨率、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復(fù)利用,流出組分易收集等優(yōu)點(diǎn),被廣泛應(yīng)用到生物、食品、醫(yī)藥研究、環(huán)境等各種領(lǐng)域
制備液相色譜儀啟動(dòng)前的檢查1、流動(dòng)相的制備要與裝置相適應(yīng)
必須經(jīng)過(guò)過(guò)濾:在送液泵內(nèi)。為了防止雜質(zhì)和顆粒進(jìn)入流路,要裝有0.45um的吸濾器,否則會(huì)導(dǎo)致流路污染。使儀器工作不正常。
(1)流動(dòng)相恢復(fù)到室溫后使用:流動(dòng)相溫度與室溫相差時(shí)。容易產(chǎn)生氣泡。導(dǎo)致儀器基線(xiàn)很難穩(wěn)定:特別是發(fā)生漂移后。一定要使流動(dòng)相恢復(fù)到室溫后再使用。
(2)流動(dòng)相務(wù)必進(jìn)行脫氣:使用制備液相色譜儀時(shí)遇到的麻煩就是流動(dòng)相產(chǎn)生氣泡。這會(huì)引起泵輸液不暢和檢測(cè)器產(chǎn)生噪聲和漂移。
(3)檢查溶劑瓶?jī)?nèi)吸濾器是否堵塞:溶劑的質(zhì)量或微生物的生長(zhǎng)會(huì)堵塞吸濾器。從而影響液相色譜系統(tǒng)的正常運(yùn)行。
有效防止吸濾器堵塞的方法:①若需使用含鹽的流動(dòng)相,使用前一定要過(guò)濾;②流動(dòng)相若為蒸餾水或含鹽的緩沖液,建議現(xiàn)用現(xiàn)配;③盡量避免溶劑瓶在陽(yáng)光下暴曬。
吸濾器堵塞后的處理方法:①取下吸濾器濾頭,放在(1:4,v/v)硝酸溶液燒杯中超聲清洗15min;②取出后用蒸餾水超聲清洗10min;③用吸耳球吹出過(guò)濾頭中的液體;④再換蒸餾水超聲清洗10min;⑤用吸耳球吹出過(guò)濾頭中的水分:將吸濾器濾頭重新放入溶劑瓶中(正相系統(tǒng)注意將吸濾器濾頭烘干再使用)。